EGES-based Gene Editing

介绍

全基因组人源化小鼠模型因其卓越的跨场景适应性
，，，正成为人源化研究领域的优先选择。。。这些模型不仅表现出更接近人类的基因表达，，
，取得了更高的成功率，，更对小核酸药物的药效学研究至关重要。。

当前技术面临哪些挑战？？

众多基因跨度较大，，，超过100kb-200kb。。采用受精卵CRISPR技术（最大编辑能力≤20kb）或胚胎干细胞重组技术（最大编辑能力≤30kb）靶向修饰此类基因存在显著技术瓶颈。
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尽管BAC转基因技术可实现200kb以上大片段人源基因向小鼠基因组的转移，，，但这些小鼠并未消除鼠源同源基因，，，并且需要较长周期来构建品系
，，，无法匹配科学研究日益增长的需求。
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安安物联开发的EGES有哪些优势？？？

安安物联开发的胚胎干细胞EGE技术（EGES）整合CRISPR-Cas9和小鼠胚胎干细胞（ES细胞）
，，实现了靶向超长DNA片段。。它有效结合了小鼠胚胎干细胞中的大片段同源重组能力
，，并通过CRISPR/Cas9诱导DNA双链断裂后的高效修复机制。
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目前，，该技术已成功靶向约150 kb的基因片段，
，，，我们正在努力突破到170 kb。。
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靶向策略示意图

该技术基于胚胎干细胞，，
，，模拟了ES细胞重组技术的流程和周期，，，，其核心创新在于靶向载体免除体外线性化步骤。。。
。在同时电转靶向载体和sgRNA质粒进入干细胞后，，，通过阳性克隆筛选
。。。整个项目大约需要12个月才能获得阳性杂合小鼠。
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EGES技术工作流程