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RenNano小鼠针对TFR1、、4-1BB和ALB的免疫反应评估:RenNano小鼠经TFR1和4-1BB(膜性抗原)免疫后采集血清,,,稀释后与表达目标抗原的CHO细胞共孵育。。使用荧光染料标记的二抗检测CHO细胞结合的重链抗体(HCAbs),,,并通过流式细胞术测定平均荧光强度(MFI),,,以指示抗原特异性HCAb的滴度。。。针对ALB(分泌型抗原)免疫的小鼠血清经稀释后与荧光标记的二抗孵育,,,,通过ELISA测定OD450值,,,以指示抗原特异性HCAb的滴度。。。。
RenNano小鼠来源的HCAbs具有高度多样性,,并且许多包含较长的CDR3区域。。通过重链种系基因使用情况和CDR3长度对抗原特异性重链抗体(HCAbs)进行分析。。。结果显示HCAbs具有广泛的IGHV种系多样性,,,,且大多数CDR3长度超过12个氨基酸,,部分超过17个氨基酸。。。。
通过表面等离子共振(SPR)技术检测了68个针对8个靶点(4-1BB、、TROP2、、、、IL3RA、、、OX40、、、Nectin-4、、、ROR1、、、、PSMA 和 DLL3)的RenNano来源的HCAbs的亲和力。。。。对于大多数HCAbs,,,KD值在10-6 ~ 10-10 M范围内。。。
RenNano小鼠的B细胞发育和分化特征。。RenNano小鼠在外周淋巴器官(脾脏 [SP] 和淋巴结 [LN])中的B细胞比例与野生型(WT)小鼠或RenMab小鼠相当。。。其脾脏中滤泡B细胞(FO-B)和边缘区B细胞(MZ-B)的比例也与WT小鼠或RenMab小鼠接近。。。。
RenNano HCAbs的理化性质分析。。RenNano HCAbs在一步纯化后显示出高纯度(A)。。HCAbs在疏水相互作用高效液相色谱(HIC-HPLC)和阳离子交换高效液相色谱(CIC-HPLC)中保留时间较短,,显示出优异的亲水性和特异性(图B、、、C)。。此外,,,,RenNano HCAbs还具有良好的热稳定性(图D)。。