CRISPR/EGE-based Gene Editing

安安物联在CRISPR/Cas9技术基础上开发和优化出一套更加高效的EGETMExtreme Genome Editing)基因编辑系统。。。与基础的CRISPR / Cas9相比,,, EGETM介导的同源重组效率提高了近20倍,,使我们的模型制备开发过程更加快速且有效。。
CRISPR/EGE™-based Gene Editing

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    介绍
    使用EGE™技术的CRISPR服务

    CRISPR(clustered,regularly interspaced,short palindromic repeats)是一种细菌降解入侵病毒DNA和其他外源DNA的防御机制。。来源于化脓链球菌的CRISPR / Cas9系统是目前最常用的一种。。

    CRISPR/Cas9系统的生化机制是什么??

    Cas9蛋白首先与CRISPR RNA(crRNA)和TRACER RNA(tracrRNA)结合,,形成复合物,,,随后结合到目标序列上,,形成RNA-DNA复合物。。该复合物最终在DNA中产生双链断裂。。。。crRNA识别目标DNA序列,,tracrRNA是Cas9活性的保守必要组分。。。

    为了简化实验室中基因编辑的程序,,,将crRNA和tracrRNA融合在一起,,,形成单链向导RNA(sgRNA)。。可以通过转染表达sgRNA和Cas9蛋白的质粒来编辑目标基因。。。。CRISPR / Cas9技术已成功用于细菌,,,,酵母,,植物,,,鱼类和哺乳动物,,,,是迄今最有效的基因编辑技术。。

    为什么选择CRISPR/EGE™平台????(CRISPR/EGE™与标准CRISPR/Cas9的比较)

    最近,,,基因编辑服务的重点已经转向基于CRISPR/Cas9的基因编辑技术,,,,因为它由于其效率和多功能性,,,正在成为大多数商业基因靶向服务的金标准。。。。您可能已经听说,,,,使用标准的CRISPR/Cas9服务技术时,,,外源DNA与目标基因组之间的同源重组效率通常较低。。这确实是事实。。然而:

    安安物联已经开发了创新的EGE™系统,,,,基于CRISPR/Cas9基因靶向平台。。。通过其位点特异性的基因编辑,,EGE™比单独使用CRISPR/Cas9在插入大型DNA片段方面效率提高了近20倍,,非常适合用于构建各种类型的基因修饰小鼠/大鼠和细胞模型。。。。因此,,,EGE™缩短了构建基因编辑动物模型的时间,,并且安安物联的基因编辑服务项目成功率高达98%。。

    使用EGE™可以创建的基因修饰模型包括但不限于:常规的基因敲除/敲入、、、条件性敲除/敲入、、、安全位点敲入、、人源化等。。。。

    我应该选择CRISPR/EGE™还是ESC/HR????

    在安安物联,,,85%的小鼠和100%的大鼠基因编辑项目都是通过EGE™技术生成的。。尽管EGE™技术相对更便宜,,且能够比ESC技术提供更短的项目周期,,,但在敲入片段大于18kb的项目中,,仍需要使用ESC/HR技术。。。

    安安物联 CRISPR/Cas9基于EGE™技术的优势:
    High Speed The F0 generation positive mouse can be obtained in two months at the earliest, while the F1 generation can be obtained in five months
    Zero Risk Supported by a strong production platform, customers will be fully refunded if the project fails
    High Efficiency Compared with standard CRISPR/Cas9 technology, the efficiency of homologous recombination mediated by the EGE™ system is increased by 10-20 fold
    High Quality Southern blot screening minimizes follow-up experimental risks caused by random insertions
    Diversification Conventional knockout, conditional knockout, and gene knockin, etc.
    No Species Limitation Cell line, mouse, rat, pig, monkey, and zebra fish, etc.
    安安物联CRISPR/Cas9基于EGE系统服务流程:
    所有项目始终执行严格的质量控制(QC)

    在安安物联,,,,我们非常重视质量控制(QC),,因我们的专家深知QC是决定项目成败的关键分水岭。。。了解更多关于我们严格质量控制的信息。。。。

    Southern blot排除随机插入

    对大量数据统计分析发现,,,基于CRISPR/Cas9技术的基因编辑课题中,,随机插入概率约为32%(来自打靶载体)。。。而在这32%中,,,有14%的随机插入无法依靠交配传代去除。。排除随机插入的金标准是Southern blot检测。。。。安安物联坚持进行Southern检测,,,,以确保基因编辑获得的动物不存在随机插入。。

    Southern blot to screen out random insertions
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